2021年，熙华药业推出莫西沙星RC-4杂质的制备分离方案，莫西沙星（moxifloxacin）是一种新型超广谱喹诺酮类抗菌药，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、衣原体和支原体均有良好的抗菌活性。因其具有抗菌性强、抗菌谱广、不良反应少等特点，在临床上被广泛应用于治疗金黄色葡萄球菌、流感杆菌、肺炎球菌等引起的获得性肺炎、慢性支气管炎、急性咽炎、急性鼻窦炎以及急性扁桃体炎等。

RC-4杂质是一种莫西沙星降解杂质，也是盐酸莫西沙星滴眼液中的特定已知杂质。目前因为该杂质生产困难且无稳定供应商，给莫西沙星的质量研究工作造成一定阻碍。为此，我们针对这个难点开展了系列研究，最终通过制备分离的方式获得了该杂质，纯度大于95%。

图1.莫西沙星及其氧化降解杂质RC-4

二、实验部分

2.1 试剂

乙腈：HPLC级；

磷酸盐：HPLC级；

水：超纯水

2.2仪器及耗材

制备液相：SHIMADZU LC-20AP；

制备柱：YMC-Actus Triart C18，250×20.0mm，5um，12nm

三、结果

3.1色谱条件的确定

在前期实验中，我们以莫西沙星加速稳定性样品作为制备原料，通过筛选色谱柱，优化制备条件，最终确定了RC-4的分离方法。如图2所示，RC-4于RT 18.9 min流出，峰形及分离度良好，无肩峰与拖尾峰，可在此条件下与其他物质有效分离。

图2.处理后的莫西沙星样品在制备液相中的色谱图

3.2上样量的选择

 为了考察进样量对分离效果的影响，如图3所示，我们测试了进样量为1.5mL（蓝色）、3mL（红色）和5mL（黑色）下的分离情况。随着进样量的增大，RC-4峰变宽，但仍然维持了较好的峰形且分离度良好，未发生过载现象。因此，为了提高制备效率，我们在后续工作中，使用最大进样量（5mL）开展分离工作。

图4.FRC组分收集报告图

图5.LC-20AP大馏分收集装置

3.4仪器、色谱柱及方法的重现性

在制备过程中，我们对同一序列中的图谱进行随机抽样对比，如图6所示，在相同条件下，RC-4杂质的峰形及保留时间重现性良好（RT 18.9 min）。

图6.同一序列中随机抽取的十份色谱图对比

最终，如图7所示，我们将收集到的组分通过高分辨质谱进行分析，确认其为RC-4杂质，含量可达98.5%（图8）。此外，由于系统的重现性良好，上述方法可在无人值守的工况下连续工作36小时（与流动相容器体积有关），大大提高了分离效率。

图7. RC-4杂质高分辨质谱图

图8.RC-4收集组分纯度图

3.5结论

综上，我们通过SHIMADZU LC-20AP制备液相对莫西沙星加速稳定性样品中的RC-4杂质进行了分离纯化，最终得到了高纯度杂质对照品（95%以上）。此外，该方法及硬件体系稳定、可控，可以全自动运行，大大提高了分离制备的效率，。

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上海熙华药业有限公司（简称“熙华药业”）是熙华检测的全资子公司。熙华药业的药物研发部门专门从事原料药工艺研发，大小分子和基因细胞治疗产品的分析研发，创新药制剂研发和临床用制剂生产，药政申报以及CMC一体化研发申报。制剂团队也从事仿制药制剂工艺研发，放大和技术转移，分析支持和药政申报服务。熙翔制药提供高级中间体与原料药的研发和商业化生产。制剂中试车间生产符合cGMP规范的临床用制剂产品。熙华药业整合了从化学原料药（API）到制剂（DP）的研发及生产，为创新药和仿制药的研发商业化生产的整个药品生命周期提供了一体化解决方案。熙华控股的美国普林迈瑞（Primera）提供大、小分子和基因细胞治疗产品的分析服务，生物分析和数据统计业务，拓展了熙华在美国开展生物分析、分析服务及临床实验数据统计工作的能力。

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